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组成，其功能与其分子量直接相关 ［6］ 。目前已有研 2301），辣根酶标记山羊抗小鼠免疫球蛋白 G（IgG）（中
究证实透明质酸寡糖（hyaluronic acid oligosaccharide， 杉金桥，ZB-2305）；血糖仪（欧姆龙 HGM-112 型）；
o-HA）（相对分子质量 <10 kDa）可通过增强血管生成 血糖试纸（欧姆龙 AS1 型）；超氧化物歧化酶（superoxide
促进创面愈合，对急性创面有修复作用 ［7］ 。本课题组 dismutase，SOD）、 丙 二 醛（malonic dialdehyde，
前期研究也证实 o-HA 可刺激血管生成、加速创面重新 MDA）检测试剂盒（中国南京建成生物工程研究所）。
上皮化、促进糖尿病大鼠创面愈合 ［8］ ，但其促进糖尿 1.3 o-HA 软膏的制备 采用乳化法制备 o-HA 软膏，
病小鼠创面愈合的机制研究尚不深入。为促进 o-HA 的 即将 6.0 g 黄凡士林、6.3 g 硬脂酸、4.8 g 单硬脂酸甘油酯、
进一步开发，本研究拟建立 DCU 模型，探究 o-HA 对 7.5 g 液状石蜡 75 ℃加热至融化制成油相，将 6.0 g 甘油、
糖尿病小鼠创面愈合的作用及可能机制。 0.60 g 十二烷基硫酸钠、0.075 g 尼泊金甲酯、28.8 ml
1 材料与方法 蒸馏水 80 ℃加热至融化制成水相Ⅰ，向水相Ⅰ中加入
1.1 实验动物 90 只雄性 SPF 级昆明小鼠，6 周龄， 0.3 g o-HA（0.5%）/0.6 g o-HA（1%）/1.2 g o-HA（2%）
体质量（22±2）g，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司， 制成水相Ⅱ，水相Ⅱ缓慢加入油相中分别制备低、中、
许可证号：SCXK（鲁）20190003。小鼠饲养温度22~25 ℃， 高剂量 o-HA 软膏，边加边搅拌，直至冷凝。
相对湿度 40%~60%。经山东省药学科学院 - 药物安 1.4 糖尿病小鼠模型及创面模型的建立 参考文
全评价中心实验动物管理和使用委员会（Institutional 献［10］构建糖尿病小鼠模型，所有小鼠于造模前 1 d
Animal Care and Use Committee，IACUC）批准试验（编号： 禁食不禁水 16 h，次日上午尾部采血测空腹血糖（fasting
IACUC-2021-004）。实验时间为 2021 年 4—12 月。 blood glucose，FBG）后，以 150 mg/kg 剂量一次性腹腔
1.2 药物与试剂 o-HA 由山东省药学科学院自制 ［9］ 注射STZ以诱发糖尿病。所有小鼠每周检测FBG水平（禁
（重均分子量：2.7 kDa，批号：20201021）；链脲佐 食 6 h），2 次或 2 次以上 FBG ≥ 16.7 mmol/L 判定为造
菌素（streptozotocin，STZ）（北京博爱港生物技术有限 模成功。
公司）；活检穿孔器（Kai medical），黏合剂（Krazy， 高血糖状态持续 6 周后造成慢性糖尿病状态，所有
744-3514），RIPA 裂 解 液（radioimmunoprecipitation 小鼠利用全层皮肤切除环形夹板法建立创面模型 ［11-13］
lysis buffer，RIPA）和苯甲基磺酰氟（phenylmethanesulfonyl （图 1）。小鼠腹腔注射 1% 戊巴比妥钠（40 mg/kg）
fluoride，PMSF）（上海碧云天生物技术有限公司， 进行麻醉，将小鼠脊柱两侧皮肤的毛发去除干净，使用
P0013B，ST506）；β- 肌 动 蛋 白（β-action）（Cell 75% 酒精对造模处皮肤进行消毒，以脊柱为中线捏起小
Signaling，8457）；核因子 E2 相关因子 2（NF-E2-related 鼠背部皮肤，使用直径 6 mm 的皮肤活检打孔器按压形
factor 2，Nrf2）（Proteintech，16396-1-AP）， 血 红 素 成两个对称的圆形全层皮肤切除创口，用黏合剂将硅胶
加氧酶 1（heme oxygenase-1，HO-1）（Cell Signaling， 夹板固定在创面周围，用 5-0 缝合线缝合后用无菌透明
86806），NAD（P）H 醌 氧 化 还 原 酶 1〔NAD（P） 敷料覆盖创面。实验中共 80 只小鼠注射 STZ，10 只因
H quinone oxidoreductase 1，NQO1〕（Cell Signaling， 血糖过低或过高死亡，5 只造模未成功，2 只出现并发症，
3187）；辣根酶标记山羊抗兔 IgG（中杉金桥，ZB- 3 只体质量过轻，均未纳入分组。
建立对称创面 放置硅胶夹板 固定硅胶夹板 敷料覆盖创面 绷带包扎创面
注：小鼠创面模型方法：（1）使用活检穿孔器制作两个大小对称的创面；（2）将硅胶环放置在创面中心，用黏合剂固定；（3）使用尼龙
线进行缝合；（4）使用透明敷料覆盖创面，防止细菌进入；（5）使用弹性自粘绷带包裹小鼠防止敷料脱落
图 1 创面模型的建立
Figure 1 Establishment of the wound model
