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再 500 μl 1×BD Perm/Wash buffer 重悬细胞,上流式 2.3 ELISA 检 测 各 组 IFN-γ、IL-2、IL-17、
细胞仪检测。 IL-4、IL-10、TGF-β 细胞含量比较,差异均有统计
Th1、Th2 细胞检测步骤同上,CD4 APC-CY7 孵育 学 意 义(P<0.05); 其 中 Model 组 IFN-γ 细 胞 含 量
重悬后,其中 Th1 检测加入 IFN-γ PE 孵育,Th2 检测 高 于 Control 组,Model+5-ASA 组 IFN-γ 细 胞 含 量 低
加入 IL-4 PE 孵育;Treg 细胞检测步骤同上,CD4 APC- 于 Model 组;Model 组 IL-2 细胞含量高于 Control 组,
CY7 孵育重悬后,加入 FOXP3 Alexa Fluor® 488 孵育。 Model+FMT 组、Model+5-ASA 组 IL-2 细 胞 含 量 低 于
1.7 ELISA 检 测 将 IFN-γ、IL-2、IL-17、IL-4、 Model 组;Model 组 IL-17 细 胞 含 量 高 于 Control 组,
IL-10、TGF-β 试剂盒中所有试剂取出恢复到室温,并 Model+FMT 组、Model+5-ASA 组 IL-17 细胞含量均分别
对上述指标进行检测,设置标准品孔和样本孔,标准品 低 于 Control 组 和 Model 组,Model+5-ASA 组 IL-17 细
孔各加不同浓度的标准品 50 μl。分别设空白孔、待测 胞含量低于 Model+FMT 组;Model 组 IL-4 细胞含量低
样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释 于 Control 组,Model+FMT 组 IL-4 细胞含量低于 Control
液 40 μl,然后再加待测样品 10 μl。每孔加入酶标试 组、高于 Model 组,Model+5-ASA 组 IL-4 细胞含量高
剂 100 μl,空白孔除外,用封板膜封板后置 37 ℃温育
60 min。小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干洗涤,拍干。
每孔先加入显色剂 A 50 μl,再加入显色剂 B 50 ml,
轻轻震荡混匀,37 ℃避光显色 15 min。每孔加终止液
50 μl,终止反应,450 nm 波长测量各孔的 OD 值。
1.8 统计学方法 采用 SPSS 19.0 软件进行统计学分析,
计量资料以( ±s)表示,多组间比较采用单因素方差
分析,组间两两比较采用 LSD-t 检验。以 P<0.05 为差 Control 组 Model 组
异有统计学意义。
2 结果
2.1 透射电镜分析 各组肠组织透射电镜超微结构显
示:Control 组微绒毛形态规则,排列整齐,较多杯状细
胞,线粒体丰富,嵴结构清楚,粗面内质网未见改变;
Model 组上皮细胞表面微绒毛稀疏,长短不一,形态不
规则,细胞连接间隙增宽,杯状细胞减少,胞质内有空泡, Model+FMT 组 Model+5-ASA 组
线粒体肿胀,部分嵴消失,个别内质网扩张或呈空泡变 注:Control 组 = 正常对照组,Model 组 = 溃疡性结肠炎模型组,
Model+FMT 组 = 溃疡性结肠炎模型 + 粪菌移植治疗组,Model+5-ASA
化;Model+FMT 组与 Model+5-ASA 组微绒毛较为致密,
组 = 溃疡性结肠炎模型 +5- 氨基水杨酸治疗组
形态正常,杯状细胞数目较多,线粒体轻微肿胀,粗面 图 1 各组小鼠肠组织透射电镜超微结构观察
内质网病变不明显,见图 1。 Figure 1 Ultrastructural observation of intestinal tissues of mice in each
group by transmission electron microscope
2.2 流 式 细 胞 检 测 各 组 Th17、Th1、Th2、Treg 细
胞含量比较,差异均有统计学意义(P<0.001);其
表 1 各组小鼠肠组织中 Th17、Th1、Th2、Treg 细胞含量比较( ±s,
中 Model 组 Th17 细胞含量高于 Control 组,Model+FMT ng/L)
组 Th17 细 胞 含 量 高 于 Control 组、 低 于 Model 组, Table 1 Comparison of Th17,Th1,Th2,and Treg cell content in
intestinal tissues of mice in each group
Model+5-ASA 组 Th17 细胞含量低于 Control 组、Model
组别 只数 Th17 Th1 Th2 Treg
组、Model+FMT 组;Model 组 Th1 细胞含量高于 Control
Control 组 15 0.88±0.15 8.86±3.00 7.71±1.30 5.94±1.24
组,Model+FMT 组、Model+5-ASA 组 Th1 细 胞 含 量 均 a a a a
Model 组 15 5.60±1.00 28.20±3.30 1.76±1.01 0.97±0.51
分 别 低 于 Control 组、Model 组;Model 组 Th2 细 胞 含 Model+FMT 组 15 1.77±0.30 ab 12.50±2.22 ab 3.70±1.61 ab 3.64±1.28 ab
量 低 于 Control 组,Model+FMT 组 Th2 细 胞 含 量 低 于 Model+5-ASA 组 15 0.47±0.12 abc 11.09±2.07 ab 4.65±1.21 abc 4.20±0.85 ab
Control 组、 高 于 Model 组,Model+5-ASA 组 Th2 细 胞 F 值 189.191 160.214 54.751 61.371
含量低于 Control 组、高于 Model 组和 Model+FMT 组; P 值 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
b
a
Model 组 Treg 细胞含量低于 Control 组,Model+FMT 组、 注: 表 示 与 Control 组 相 比 P<0.05, 表 示 与 Model 组 相 比
c
P<0.05, 表 示 与 Model+FMT 组 相 比 P<0.05;Th= 辅 助 性 T 细
Model+5-ASA 组 Treg 细胞含量均分别低于 Control 组、
胞,Control 组 = 正 常 对 照 组,Model 组 = 溃 疡 性 结 肠 炎 模 型 组,
高于 Model 组,差异均有统计学意义(P<0.05),见表 1、 Model+FMT 组 = 溃疡性结肠炎模型 + 粪菌移植治疗组,Model+5-ASA
图 2。 组 = 溃疡性结肠炎模型 +5- 氨基水杨酸治疗组