Page 48 - 中国全科医学2022-03
P. 48

http://www.chinagp.net   E-mail:zgqkyx@chinagp.net.cn  ·301·


                                   TM
           再 500 μl 1×BD Perm/Wash  buffer 重悬细胞,上流式            2.3 ELISA 检 测  各 组 IFN-γ、IL-2、IL-17、
           细胞仪检测。                                              IL-4、IL-10、TGF-β 细胞含量比较,差异均有统计
               Th1、Th2 细胞检测步骤同上,CD4 APC-CY7 孵育                 学 意 义(P<0.05); 其 中 Model 组 IFN-γ 细 胞 含 量
           重悬后,其中 Th1 检测加入 IFN-γ PE 孵育,Th2 检测                  高 于 Control 组,Model+5-ASA 组 IFN-γ 细 胞 含 量 低
           加入 IL-4 PE 孵育;Treg 细胞检测步骤同上,CD4 APC-                于 Model 组;Model 组 IL-2 细胞含量高于 Control 组,
           CY7 孵育重悬后,加入 FOXP3 Alexa Fluor® 488 孵育。             Model+FMT 组、Model+5-ASA 组 IL-2 细 胞 含 量 低 于
           1.7 ELISA 检 测  将 IFN-γ、IL-2、IL-17、IL-4、             Model 组;Model 组 IL-17 细 胞 含 量 高 于 Control 组,
           IL-10、TGF-β 试剂盒中所有试剂取出恢复到室温,并                       Model+FMT 组、Model+5-ASA 组 IL-17 细胞含量均分别
           对上述指标进行检测,设置标准品孔和样本孔,标准品                            低 于 Control 组 和 Model 组,Model+5-ASA 组 IL-17 细
           孔各加不同浓度的标准品 50 μl。分别设空白孔、待测                         胞含量低于 Model+FMT 组;Model 组 IL-4 细胞含量低
           样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释                             于 Control 组,Model+FMT 组 IL-4 细胞含量低于 Control
           液 40 μl,然后再加待测样品 10 μl。每孔加入酶标试                      组、高于 Model 组,Model+5-ASA 组 IL-4 细胞含量高
           剂 100 μl,空白孔除外,用封板膜封板后置 37 ℃温育
           60 min。小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干洗涤,拍干。
           每孔先加入显色剂 A 50 μl,再加入显色剂 B 50 ml,
           轻轻震荡混匀,37 ℃避光显色 15 min。每孔加终止液
           50 μl,终止反应,450 nm 波长测量各孔的 OD 值。
           1.8 统计学方法 采用 SPSS 19.0 软件进行统计学分析,
           计量资料以( ±s)表示,多组间比较采用单因素方差
           分析,组间两两比较采用 LSD-t 检验。以 P<0.05 为差                             Control 组              Model 组
           异有统计学意义。
           2 结果
           2.1 透射电镜分析 各组肠组织透射电镜超微结构显
           示:Control 组微绒毛形态规则,排列整齐,较多杯状细
           胞,线粒体丰富,嵴结构清楚,粗面内质网未见改变;
           Model 组上皮细胞表面微绒毛稀疏,长短不一,形态不
           规则,细胞连接间隙增宽,杯状细胞减少,胞质内有空泡,                                Model+FMT 组            Model+5-ASA 组
           线粒体肿胀,部分嵴消失,个别内质网扩张或呈空泡变                               注:Control 组 = 正常对照组,Model 组 = 溃疡性结肠炎模型组,
                                                               Model+FMT 组 = 溃疡性结肠炎模型 + 粪菌移植治疗组,Model+5-ASA
           化;Model+FMT 组与 Model+5-ASA 组微绒毛较为致密,
                                                               组 = 溃疡性结肠炎模型 +5- 氨基水杨酸治疗组
           形态正常,杯状细胞数目较多,线粒体轻微肿胀,粗面                                    图 1 各组小鼠肠组织透射电镜超微结构观察
           内质网病变不明显,见图 1。                                      Figure 1 Ultrastructural observation of intestinal tissues of mice in each
                                                               group by transmission electron microscope
           2.2  流 式 细 胞 检 测  各 组 Th17、Th1、Th2、Treg 细
           胞含量比较,差异均有统计学意义(P<0.001);其
                                                               表 1 各组小鼠肠组织中 Th17、Th1、Th2、Treg 细胞含量比较( ±s,
           中 Model 组 Th17 细胞含量高于 Control 组,Model+FMT           ng/L)
           组 Th17 细 胞 含 量 高 于 Control 组、 低 于 Model 组,          Table 1 Comparison of Th17,Th1,Th2,and Treg cell content in
                                                               intestinal tissues of mice in each group
           Model+5-ASA 组 Th17 细胞含量低于 Control 组、Model
                                                                  组别     只数    Th17      Th1      Th2     Treg
           组、Model+FMT 组;Model 组 Th1 细胞含量高于 Control
                                                                 Control 组  15  0.88±0.15  8.86±3.00  7.71±1.30  5.94±1.24
           组,Model+FMT 组、Model+5-ASA 组 Th1 细 胞 含 量 均                               a         a       a        a
                                                                 Model 组  15  5.60±1.00  28.20±3.30  1.76±1.01  0.97±0.51
           分 别 低 于 Control 组、Model 组;Model 组 Th2 细 胞 含          Model+FMT 组  15  1.77±0.30 ab  12.50±2.22 ab  3.70±1.61 ab  3.64±1.28 ab
           量 低 于 Control 组,Model+FMT 组 Th2 细 胞 含 量 低 于         Model+5-ASA 组  15  0.47±0.12 abc  11.09±2.07 ab  4.65±1.21 abc  4.20±0.85 ab
           Control 组、 高 于 Model 组,Model+5-ASA 组 Th2 细 胞            F 值         189.191  160.214  54.751  61.371
           含量低于 Control 组、高于 Model 组和 Model+FMT 组;                 P 值         <0.001   <0.001   <0.001  <0.001
                                                                                             b
                                                                    a
           Model 组 Treg 细胞含量低于 Control 组,Model+FMT 组、            注: 表 示 与 Control 组 相 比 P<0.05, 表 示 与 Model 组 相 比
                                                                     c
                                                               P<0.05, 表 示 与 Model+FMT 组 相 比 P<0.05;Th= 辅 助 性 T 细
           Model+5-ASA 组 Treg 细胞含量均分别低于 Control 组、
                                                               胞,Control 组 = 正 常 对 照 组,Model 组 = 溃 疡 性 结 肠 炎 模 型 组,
           高于 Model 组,差异均有统计学意义(P<0.05),见表 1、                  Model+FMT 组 = 溃疡性结肠炎模型 + 粪菌移植治疗组,Model+5-ASA
           图 2。                                                组 = 溃疡性结肠炎模型 +5- 氨基水杨酸治疗组
   43   44   45   46   47   48   49   50   51   52   53