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           肠道外某些疾病。该方法由来已久，且在 2013 年治疗                         干预处理，给予小鼠自由饮用正常水，普通饲料喂养，
           难辨梭状芽孢杆菌感染被写入美国食品药品监督管理局                            常温常态下饲养，不进行其他特殊处理；（2）UC 模
           指南，其安全性及有效性进一步得到了印证，适应证得                            型组（Model 组）：造模成功后，常温常态下普通饲料
           到进一步扩展      ［5］ 。                                   正常饮水饲养，给予磷酸盐缓冲液（PBS）0.2 ml/ 次对
               许多研究表明 UC 发病还与免疫细胞、炎性细胞因                        小鼠进行灌肠，1 次 /2 d，持续 10 d，共计 5 次；（3）
           子的参与有关联，免疫调节的失衡会导致炎性细胞和炎                            UC 模型 + 粪菌移植治疗组（Model+FMT 组）：造模成
           性递质释放异常，最终引发肠黏膜组织损害                    ［2］ 。本研      功后，常温常态下普通饲料正常饮水饲养，给予制备的
           究以阳性药物 5- 氨基水杨酸（5-ASA）为实验对照，                        粪菌液 0.2 ml/ 次对小鼠进行灌肠，1 次 /2 d，持续 10 d，
           通过 FMT 治疗湿热型 UC 模型验证其疗效，通过检测                        共计 5 次；（4）UC 模型 +5-ASA 治疗组（Model+5-ASA
           不同种类 T 细胞、相关炎性因子含量，探究其可能的作                          组）：造模成功后，常温常态下普通饲料正常饮水饲
           用机制。                                                养，按照 0.195 g/kg 的剂量，5-ASA 药物浓度为 0.019 5
           1 材料与方法                                             g/ml，即 20 g 小鼠灌肠 0.2 ml，1 次 /2 d，持续 10 d，共
           1.1 实验动物 雄性 C57BL/6 小鼠（4 周龄），共 60                   计5次。
           只，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司〔许可证号：                               UC 模型造模：将小鼠适应性饲养 7 d 后，置于鼠
           SCXK（湘）2019-0004〕，在常温常态下适应性饲养 1 周。                  笼饲养 IVC 系统（设置参数如下：温度 36  ℃、湿度
           本实验获得江西中医药大学实验动物伦理委员会审查批                            80%，每日持续 12 h）中饲养，给予高脂高糖饲料，并
           准（审批编号：JZYYLL20200420007）。                          给予小鼠自由饮含 2% DSS 蒸馏水，连续饲养 10 d 即可。
           1.2 实验试剂与仪器 葡聚糖硫酸钠（DSS）（货号：                             粪菌（fecal microbiota，FM）制备：取 Control 组小
           9011-18-1，上海源叶生物科技有限公司）；5-ASA（货                     鼠的 5 g 新鲜晨便，取标本溶于 10 ml 无菌 PBS 中充分
           号：89-57-6，上海源叶生物科技有限公司）；高脂高                         混匀，分别用 2.0、1.0、0.5、0.25 mm 的不锈钢筛过滤，
           糖饲料（配方：糖 15%、猪油 10%、胆固醇 4%、胆盐                       以 6 000×g 离心 15 min，取菌体，用无菌 PBS 清洗 3 次，
           0.3%、蛋黄粉 10%、基础饲料 60.7%，南京盛民科研                      重悬于 25 ml PBS 中，4 ℃冰箱保存。
           动物养殖场）；便隐血（OB）试剂（批号：B200101，                        1.4 动物取样 给药结束后，将各组小鼠用 10% 水合
           珠海贝索生物技术有限公司）；水合氯醛（批号：                              氯醛按照 400 mg/kg 腹腔注射麻醉，打开动物的腹腔及
           119957，上海展云化工有限公司）；异氟烷（批号：                          胸腔，用 1 ml 注射器抽取 0.02 ml 饱和 EDTA 溶液润管，
           S10010533，上海玉研科学仪器有限公司）；干扰素 γ                       从小鼠心脏处采血，收集血液用于流式细胞检测；将结
           （IFN-γ）PE（505808，Biolegend）； 白 介 素（IL）-             肠和盲肠取出，表面血迹冲洗干净，内容物取出后切去
           17A PE（506904，Biolegend）；FOXP3 Alexa Fluor® 488     盲肠，用于透射电镜检测、酶联免疫吸附试验（ELISA）
           （126406，Biolegend）；CD4 APC-CY7（100460，              检测。
           Biolegend）；CD25 PE（101904，Biolegend）；IL-4 PE        1.5 透射电镜观察 各组组织样品 2.5% 戊二醛固定
                                             TM
           （504104，Biolegend）；True-Nuclear  Transcription      2 h 以上，用 0.1 mmol/L 磷酸漂洗，1% 锇酸固定液固定
           Factor Buffer Set（424401，Biolegend）；Fixation/       2 h，0.1 mmol/L磷酸漂洗梯度乙醇（50%~90%）溶液脱水，
           Permeabilization Solution Kit（554714，Biolegend）；    再用丙酮脱水，包埋固化，切片切成厚度为 70 nm 薄片。
           小鼠 IL-2 试剂盒（MM-0701M1，酶免）；小鼠 IL-4                   3% 醋酸铀 - 枸橼酸铅双染，透射电镜观察。
           试 剂 盒（MM-0165M1， 酶 免）； 小 鼠 IL-10 试 剂 盒              1.6 流式细胞检测 辅助性 T 细胞（Th）17 细胞检测：
           （MM-0176M1， 酶 免）； 小 鼠 IL-17 试 剂 盒（MM-               各组取 100 μl 血液置于 12 孔板中，加入 150 μl 1640
           0170M1，酶免）；小鼠转化生长因子 β（TGF-β）                        完全培养基，加入1 μl PMA/Ionomycin mixture佛波酯/离
           试剂盒（MM-0689M1，酶免）；小鼠 IFN-γ 试剂盒                      子霉素混合物，放入培养箱中孵育 30 min 后加入 1 μl
           （MM-0182M1，酶免）；人工气候箱（PRX-80A，江                      BFA/Monensin Mixture，放入培养箱中孵育 24 h。结束后，
           苏天翔仪器）；动物呼吸麻醉机（ABM-100，上海玉                          将血液转至 EP 管中离心，弃 150 μl 上清液，将细胞
           研科学仪器）；透射电镜（JEM-1230，JEOL）；流式                       吹匀加入 CD4 APC-CY7 各 5 μl，避光孵育 15 min，
           细胞仪（NovoCyte 2060R，艾森生物）；多功能酶标仪                     1 ml PBS，400×g 离心 5 min 清洗 2 次，弃上清液。
           （S/N502000011，TECAN）；         显   微    镜（CX41       加入 500 μl Fixation/Permeabilization Solution 避光固定
           OLYMPUS）；切片机（BQ-318D，伯纳）。                           破 膜 40 min，400×g 离 心 5 min 后， 加 入 1 ml 1×BD
                                                                        TM
           1.3 实验分组与动物造模 2019年12月至2020年4月，                     Perm/Wash  buffer，清洗 2 次，再 100 μl 1×BD Perm/
                                                                   TM
           采用随机数字表法将小鼠分为 4 组，每组各 15 只，分                        Wash  buffer 重悬细胞，加入 5 μl IL-17A PE，避光孵
                                                                                            TM
           组如下：（1）正常对照组（Control 组）：不进行任何                       育 15 min。1 ml 1×BD Perm/Wash  buffer，清洗 2 次，
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