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杜氏高糖培养基（DMEM）、37 ℃、5%CO 2 条件下培养，
同一代一批H9C2细胞被随机分为5组：对照组、DOX组、
DOX+YWPC（1 mg/L） 组、DOX+YWPC（10 mg/L） 与
DOX+YWPC（100 mg/L），不同浓度的 YWPC 在添加
DOX 12 h 前进行预添加，当细胞达到约 70% 融合时添
加 1 µmol/L 的 DOX，干预 24 h 得到体外 DOX 心肌损 对照组 YWPC 组
伤模型，采用 CCK-8 法测定细胞活性，采用 Western
Blot 法测定蛋白表达情况，每种实验重复 3 次。
1.3.8 H9C2 细胞中 3-TYP 的应用 在明确 YWPC 影响
DOX 引起 H9C2 细胞凋亡及 SIRT3 表达水平改变后，
为进一步明确 SIRT3 在实验过程中的作用，将同一代另 DOX 组 DOX+YWPC 组
一批 H9C2 细胞随机分为对照组、DOX 组、DOX+YWPC 注：大鼠心肌切片 Masson 染色（×200）结果，YWPC= 黄酒多酚，
DOX= 阿霉素
组、DOX+3-TYP 组及 DOX+YWPC+3-TYP 组。DOX 干 预 图 1 YWPC 缓解 DOX 引起的大鼠心肌细胞损伤
浓 度 为 1 µmol/L， 干 预 时 间 为 24 h；DOX+YWPC 组 Figure 1 Effect of YWPC in alleviating DOX-induced myocardial injury
与 DOX+YWPC+3-TYP 组在添加 DOX 12 h 前使用 10 mg/L in the in vivo experiment with four groups of rats
YWPC 进行预干预；DOX+3-TYP 组与 DOX+YWPC+3- 表 1 大鼠心肌损伤相关各实验结果（ ±s）
TYP 组在添加 DOX 4 h 前使用 5µmol/L 3-TYP 进行预 Table 1 Results of YWPC in alleviating DOX-induced myocardial injury
干预，采用 Western Blot 法测定蛋白表达情况，实验重 explored in the in vivo experiment with four groups of rats
胶原纤维占比 LDH Bcl-2/Bax SIRT3 表达
复3次。 组别 只数 （%） （U/L） 比值 水平
1.3.9 CCK-8 法 为检测各干预条件对细胞活性的影 对照组 6 25.74±0.79 a 3 773.79±201.61 a 1.04±0.10 a 0.99±0.08 a
响，将 H9C2 细胞种于 96 孔板中，每孔约 5 000 个细胞， YWPC 组 6 24.73±3.31 4 059.88±35.08 0.90±0.06 0.84±0.05
每组设复孔 3 个。细胞贴壁后进行实验干预，干预结束 DOX 组 6 38.50±1.19 5 546.91±137.37 0.19±0.01 0.29±0.08
后按照 CCK-8 试剂盒说明书在每一个孔加入 10 µl 反 DOX+YWPC 组 6 31.68±1.13 a 4 491.68±149.93 a 0.57±0.02 a 0.53±0.04 a
应液，37 ℃培养 4 h 后用酶标仪读取各孔 450 nm 处吸 F 值 67.76 174.3 244.0 139.7
光度值，绘制吸光度值曲线，以吸光度值代表细胞活性。 P 值 <0.01 <0.01 <0.01 <0.01
a
注：表示与DOX组比较，P<0.05；YWPC=黄酒多酚，DOX=阿霉素，
1.4 统计学方法 应用 Graphpad Prism 7.0 软件绘图，
LDH= 乳酸脱氢酶，Bcl-2=B 淋巴细胞瘤 -2 蛋白，Bax=Bcl-2 相关 X
SPSS 16.0 统计学软件进行数据分析。符合正态分布的 蛋白，SIRT3= 沉默调节蛋白 3
计量资料以（ ±s）表示，多组间比较采用单因素方差
分析，两两比较采用 q 检验。以 P<0.05 为差异有统计 将大鼠心肌切片进行 TUNEL 染色，可见 DOX 组的大鼠
学意义。 心肌切片中代表凋亡的绿色亮点明显增多，呈片状分布，
2 结果 而经 YWPC 治疗后凋亡亮点减少，见图 2。
2.1 YWPC 缓解 DOX 引起的大鼠心肌细胞损伤 大 2.3 YWPC 缓 解 DOX 引 起 的 H9C2 细 胞 凋 亡 通 过
鼠心肌切片通过 MASSON 染色后可见：DOX 组大鼠心 CCK-8 法比较 DOX 作用下各组 H9C2 细胞的存活率，
肌纤维排列紊乱，大量蓝色胶原纤维贯穿心肌纤维； 五组吸光度值比较，差异有统计学意义（P<0.05），
DOX+YWPC 组大鼠心肌切片纹理部分恢复，蓝色胶原 其 中 DOX 组 吸 光 度 值 低 于 对 照 组、DOX+YWPC
纤维减少（图 1）。四组胶原纤维占比比较，差异有统 （1 mg/L）组、DOX+YWPC（10 mg/L）组、DOX+YWPC（100
计学意义（P<0.05），其中 DOX 组胶原纤维占比高于 mg/L）组，差异有统计学意义（P<0.05）。 通 过
对照组、DOX+YWPC 组，差异有统计学意义（P<0.05）。 Western Blot 法 检 测 H9C2 细 胞 蛋 白 表 达 水 平， 五 组
四组 LDH 水平比较，差异有统计学意义（P<0.05）， Bcl-2/Bax 比值比较，差异有统计学意义（P<0.05），
其中 DOX 组血清 LDH 水平高于对照组、DOX+YWPC 组， 其中 DOX 组 Bcl-2/Bax 比值低于对照组、DOX+YWPC
差异有统计学意义（P<0.05），见表 1。 （1 mg/L）组、DOX+YWPC（10 mg/L）组、DOX+YWPC（100
2.2 YWPC 缓解 DOX 引起的大鼠心肌细胞凋亡 将 mg/L）组，差异有统计学意义（P<0.05）。见图 3、表 2。
各组大鼠心脏组织制成蛋白样品后进行 Western Blot 法 2.4 体内外 SIRT3 表达情况 在动物组织蛋白中，四组
检测。四组 Bcl-2/Bax 比值比较，差异有统计学意义 SIRT3 表达水平比较，差异有统计学意义（P<0.05），其
（P<0.05），其中 DOX 组 Bcl-2/Bax 比值低于对照组、 中 DOX 组 SIRT3 表达水平低于对照组、DOX+YWPC 组，
DOX+YWPC 组，差异有统计学意义（P<0.05），见表 1。 差异有统计学意义（P<0.05）。利用免疫组织化学染色观