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           肠肽（VIP）是由肺脏和肠道分泌的活性物质，SP 表达                         MK3）；显微镜及显微照相系统（日本 Olympus 公司，
           水平升高与 COPD 患者气道炎性反应和气道高反应性的                         型号：OLYMPUS-DP70）；独立送风隔离笼具（苏州
           形成密切相关，VIP 可减轻肺内炎性反应、扩张支气管                          冯氏实验动物设备有限公司，型号：IVC- Ⅱ型）；离
           改善 COPD 患者通气阻力，同时两者均可调节肠液分泌                         心机（中国 Dlab 公司，型号：D3024）；研磨仪（武汉
           和肠道运动并维护黏膜屏障功能              ［10-11］ 。               Servicebio 公司，型号：KZ-III-F）。
               李素云教授认为“正虚积损”是 COPD 的主要病                        1.4 造模与给药方法 采用乱数表法将 50 只 SD 大鼠随
           机，“肺脾气虚”是 COPD 稳定期的主要证型                 ［12］ ，以     机分为对照组、模型组、补肺健脾组、氨茶碱组和益生
           “补肺健脾，培土生金”为法，拟定了补肺健脾方                     ［13］ 。   菌组，每组 10 只。第 1~8 周，对照组大鼠给予鼻腔滴入
           前期临床研究发现，补肺健脾方在改善 COPD 稳定期患                         0.9% 氯化钠溶液（0.2 ml/ 次，2 次 / 周），剩余 4 组大
           者肺功能、减少患者急性加重次数、改善运动耐力等方                            鼠给予香烟烟雾暴露〔30 min/ 次，2 次 /d，6 次 / 周，烟
           面具有较好的疗效        ［14］ 。同时动物实验研究也表明，补                 雾浓度（3 000±500）ppm〕联合鼻腔滴 LPS（1 mg/kg，
           肺健脾方不仅能提高肺功能、降低炎性因子表达水平，                            2 次/ 周）  ［18］ 。第 8 周造模结束时随机选取 2 只大鼠观
           显著改善 COPD 稳定期模型大鼠便溏、倦怠喜卧等一般                         察肺组织病理，大鼠气管腔变窄，肺泡结构断裂，部分
           情况，而且还能提高 COPD 大鼠骨骼肌的张力和耐力                          融合成肺大泡，支气管壁出现炎性细胞浸润，表明造模
           等 ［15-16］ 。补肺健脾方对 COPD 大鼠黏膜屏障的保护机                   成功。
           制尚不清楚，有待深入研究探讨。基于此，本实验采用                                从第9周起，补肺健脾组大鼠给予补肺健脾方（12.42
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           香烟烟雾暴露联合鼻腔滴注脂多糖（LPS）的方法制作                           g·kg ·d ）灌胃，氨茶碱组大鼠给予氨茶碱（0.027
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           COPD 稳定期大鼠模型，观察补肺健脾方对 COPD 大鼠                       g·kg ·d ）灌胃，益生菌组大鼠给予益生菌（0.9×10
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           肺肠组织 SP、VIP 和 SIgA 的调节作用。                           CFU·kg ·d ）灌胃，对照组和模型组大鼠给予 0.9%
           1 材料与方法                                             氯化钠溶液（2 ml/d）灌胃，2 次 /d，间隔 3 h，持续 4
           1.1 实验动物 2019 年 9 月至 2020 年 12 月选取 50 只             周。药量计算采用等效剂量系数折算法换算，公式为
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           SPF 级 8 周龄 SD 大鼠，雌雄各半，体质量 180~220 g，                D 大鼠 =D 人 （HI 大鼠 /HI 人 ）×（W 人 /W 大鼠 ） 。注：D 为剂量，
           购于济南朋悦实验动物繁育有限公司，许可证号：                              HI 为体型系数，W 为体质量。
           SCXK［鲁］20190003。本研究动物实验经河南中医药                       1.5 取材与指标检测 因个别大鼠在造模期间死亡，
           大学实验动物伦理委员会批准（DWLL2019020002）。                      加上造模结束前需取材验证模型，最后每组剩余 6~10
           1.2 药物 补肺健脾方（黄芪 15 g、黄精 15 g、党参 15 g、               只大鼠不等，所以各组大鼠统一取 6 只进行指标检测。
           白术 12 g、茯苓 12 g、浙贝母 9 g、地龙 12 g、厚朴 9 g、             1.5.1 肺、结肠组织病理变化 取灌注 10% 中性甲醛
           陈皮 9 g、紫菀 9 g、赤芍 15 g、淫羊藿 6 g）由河南                   溶液（约 10 ml）的左肺和结肠组织分别置于装有 10%
           中医药大学药物分析实验室提供               ［17］ ；LPS（100 mg，      中性甲醛溶液的 50 ml 固定管中，固定 72 h 后更换甲醛
           美 国 Sigma 公 司， 批 号：028M4094V ）； 氨 茶 碱               溶液，再次固定，石蜡包埋，HE 染色，光镜下观察病
           （0.1 g/ 片，海南制药厂有限公司制药一厂，国药准字                        理变化。
           H41020704）；益生菌（Probiotic IMM，60 片 / 瓶，Pure          1.5.2 肺组织 TNF-α、IL-10 表达水平 免疫组化法
           Encapsulations 有限公司，批号：6030112A）；0.9% 氯             检测炎性因子 TNF-α 和 IL-10 表达水平，每组选 6 张
           化钠溶液（500 ml/ 瓶，河南竹林众生制药股份有限公                        切片，置于 200 倍视野下，在不同区域采集 6 张图像，
           司）；红旗渠牌过滤嘴香烟（烤烟型，焦油量 10 mg，                         使用 Image-Pro Plus 6.0 软件进行统计分析，阳性结果
           烟气一氧化碳含量 12 mg，烟碱量 1.0 mg，河南中烟工                     以积分光密度（IOD）的平均值表示。
           业有限责任公司）。                                           1.5.3 支气管肺泡灌洗液（BALF）SIgA 表达水平 用
           1.3 试剂与仪器 大鼠酶联免疫吸附测定（ELISA）试                        4 ℃预冷的无菌 PBS 灌注左肺，3 ml/ 次，共 3 次，冲
           剂 盒：SIgA（GAWVN1VKA6）、SP（XL28IN2GJ5）、                洗肺腔，获得 BALF。每组取 6 支 BALF 样本分别测定
           VIP（V26VVA4LFA）购于武汉伊莱瑞特生物科技股份                       蛋白、SIgA 表达水平。
           有限公司；苏木素 - 伊红（HE）染色试剂盒（G1120）、                      1.5.4 肺、结肠组织 SP、VIP 表达水平 用 4 ℃预冷的
           BCA 蛋白定量检测试剂盒（PC0020）、羊抗兔酶标抗                        无菌 PBS 冲洗右肺和结肠，滤纸吸水，每组分别称取 6
           体（IgG-HRP）抗体（SE134）购于北京索莱宝科技有                       个组织样本（右肺和结肠组织）约 100 mg，以 1∶9 的
           限公司；肿瘤坏死因子（TNF）抗体（PA1079）、白介                        体积比加入 PBS 进行研磨，8 000 r/min 离心 6 min，取
           素 10（IL-10）抗体（RP1014）购于武汉博士德生物工                     上清液。BCA 试剂盒检测蛋白含量，ELISA 试剂盒检测
           程有限公司；全波长酶标仪（美国 Thermo 公司，型号：                       SP、VIP 表达水平。
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