Page 58 - 2023-05-中国全科医学
P. 58

2023年2月   第26卷   第5期                                 http: //www.chinagp.net   E-mail: zgqkyx@chinagp.net.cn  ·571·

           大鼠，实验期间不限制大鼠进食、饮水。实验方案通过                            个压力梯度测 3 次取评分均值，每次测量间隔 5 min。
           成都中医药大学附属医院实验动物伦理审查，伦理编号：                           AWR 评分由 2 名不知实验分组的工作人员共同进行。
           2020DL-001。                                             结肠和海马体组织 BDNF、SP 表达水平检测：采
           1.2 主要试剂及药物 戊巴比妥钠（上海斯信生物科                           用 ELISA 法进行检测。治疗结束后 1 d，每只大鼠按 2.5
           技有限公司）、BCA 蛋白浓度测定试剂盒（上海西唐生                          ml/kg 的剂量予 2% 戊巴比妥钠腹腔注射，麻醉后迅速
           物科技有限公司，批号：WB101）、BDNF 酶联免疫吸                        沿大鼠腹中线用剪刀剖开腹部暴露肠道，距肛门 5~7 cm
           附测定（ELISA）试剂盒（上海西唐生物科技有限公司，                         处取出结肠片段长约 2 cm。同时用咬钳剪开大鼠颅骨，
           批号：F15100）、SP ELISA 试剂盒（上海西唐生物科                     剥离完整大鼠海马体组织。将组织标本转移至 -80 ℃冰
           技有限公司，批号：F16804）。痛泻要方组成：白术                          箱中保存直至检测。参照试剂盒说明书操作，酶标仪测
           12 g、白芍 8 g、陈皮 6 g、防风 4 g，中药由四川省中医                  定 450 nm 处 OD 值，分别计算大鼠结肠组织和海马组
           院中药房采购于四川新荷花中药饮片公司，并由该院药                            织 BDNF、SP 表达水平。
           剂科经浸泡、煎煮、过滤浓缩等工艺制作中药浸膏混                             1.6 统计学方法 采用 SPSS 25.0 统计学软件进行数据
                                                                                               -
           悬液。                                                 处理。符合正态分布的计量资料以（x±s）表示，方差
           1.3 造模方法 参照文献［19-20］方法建造 IBS-D 大                    齐时多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采
           鼠模型，除空白组外，其余各组大鼠均采用结直肠扩张                            用 LSD-t 法；不满足正态分布的计量资料以 M（P 25 ，
           + 慢性束缚应激的造模方法建立内脏敏感型 IBS-D 大鼠                       P 75 ）表示，多组间比较采用 Kruskal-Wallis 检验，组间
           模型。结直肠扩张：将自制的气囊涂抹石蜡油后塞进大                            两两比较采用 Bonferroni 法。以 P<0.05 为差异有统计学
           鼠肛门约 7 cm，在肛门外 1 cm 处用胶带将其固定在大                      意义。
           鼠尾根部，在 80 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）气囊的               2 结果
           压力下维持 5 min，气囊每次使用前后均需要进行酒精                         2.1 大鼠一般状态 造模前四组大鼠精神状态良好，
           消毒处理。慢性束缚应激：将大鼠仰卧位固定于束缚架                            活泼好动，情绪平和，皮毛顺滑有光泽，肛门周围较为
           （20 cm×6 cm×5 cm）上 2 h，限制活动。1 次 /d，共                清洁。造模后模型大鼠逐渐出现精神萎靡，活动减少，
           14 d。使用腹部撤退反射（abdominal withdrawal reflex，          易躁动或畏惧，饮食、饮水量减少，皮毛晦暗易脱落，
           AWR）  ［21］ 评价模型大鼠内脏敏感性，评分越高表明腹                      肛门周围有较多稀便附着，AWR 评分在压力 75 mm Hg
           部撤退反应越敏感；当结直肠扩张压力达到 75 mm Hg                        及以上时均≥ 3 分，说明造模后大鼠内脏敏感性增高，
           及以上时，AWR 评分 <3 分则视为造模失败。                            成功建立 IBS-D 模型大鼠，所有大鼠存活。B-F 组和 C-B
           1.4 干预方法 按照体表面积系数换算，以成年人                            组大鼠治疗后精神状态较治疗前有不同程度好转，活动
           70 kg、大鼠 200 g，换算系数 6.3 计算大鼠每日中药饮                   增多，反应迅速，饮食饮水量恢复，皮毛逐渐恢复光泽，
           片用量   ［22］ ：白芍 0.72 g/kg、防风 0.36 g/kg、陈皮 0.54       肛门周围较模型组干净。
           g/kg、白术 1.08 g/kg。浸膏溶液浓度为： 白芍 0.180                 2.2 大鼠体质量变化情况 四组大鼠初始体质量比较，
           g/ml、防风 0.090 g/ml、陈皮 0.135 g/ml、白术 0.27            差异无统计学意义（P>0.05）；四组大鼠造模后体质量
           g/ml。空白组和模型组均予以 5 ml/kg 蒸馏水灌胃，B-F                   增长量、治疗后体质量增长量比较，差异有统计学意义
           组予以白芍浸膏 4 ml/kg、防风浸膏 4 ml/kg 灌胃，C-B                 （P<0.05）。
           组予以陈皮浸膏 4 ml/kg、白术浸膏 4 ml/kg 灌胃，1 次 /d，                 模型组大鼠造模后、治疗后体质量增长量小于空白
           共 14 d。                                             组，差异有统计学意义（P<0.05）；B-F 组大鼠造模后
           1.5 观察指标及检测方法 一般状态：造模前、造模                           体质量增长量小于空白组，治疗后体质量增长量大于模
           后、治疗后每 14 d 观察四组大鼠的精神状况、活动情况、                       型组，差异有统计学意义（P<0.05）；C-B 组大鼠造模
           皮毛色泽、饮食量及体质量变化情况。                                   后、治疗后体质量增长量小于空白组，同时治疗后体质
               大便性状：分别于造模前 1 d、造模后和治疗后对                        量增长量大于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）；
           每只大鼠单笼饲养，收集 4 h 大便，依据布里斯托大便                         B-F 组及 C-B 组大鼠造模后、治疗后体质量增长量比较，
           分类法（Bristol Stool Classification）对大便进行分级评           差异无统计学意义（P>0.05），见表 1。
           分 ［23］ 。                                            2.3 大鼠布里斯托大便分类法评分 四组大鼠造模
               AWR 评分：于造模后及治疗后各检测 1 次。检测                       前布里斯托大便分类法评分比较，差异无统计学意义
           时将自制的气囊涂抹石蜡油后塞进大鼠肛门内约 7 cm，                         （P>0.05）；四组大鼠造模后、治疗后布里斯托大便分
           用血压计向气囊内缓慢加压，观察大鼠在 20、40、                           类法评分比较，差异有统计学意义（P<0.05）。
           60、80 mm Hg 压力梯度下对气囊扩张刺激的反应，每                           模型组、B-F 组和 C-B 组大鼠造模后布里斯托大
   53   54   55   56   57   58   59   60   61   62   63