Page 103 - 2022-26-中国全科医学
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中医药对疾病的治疗常以多靶点、多通路发挥作用，本 焦显微镜（奥林巴斯，FV1000-D）；组织研磨仪（QIAGEN，
研究将探讨复方 SY 对 LN 小鼠的治疗作用及对小鼠补 tissuelyser Ⅱ），超声波破碎仪（SonicsVibra-Cell），蛋
体旁路途径激活的影响。 白转印系统（美国 Bio-Rad 公司，Trans-Blot Turbo），
1 材料与方法 蛋白电泳仪（美国 Bio-Rad 公司，PowerPac Basic），
1.1 实验动物 本次动物实验按照中国人民解放军总 成像分析系统（Bio-Rad，Chemidoc MP）。
医院医学伦理委员会审批的试验方案（伦审第 S2019- 1.4 动物干预治疗 以各组对应剂量灌胃，根据动物
095-01 号）进行。研究时间为 2021 年 4—7 月。SPF 级 实验与成人体表面积换算法，确定复方 SY 干预剂量如
MRL/lpr 小鼠（8 周龄）购于卡文斯百格（苏州）（CAVENS 下：SY 低剂量组为 15.34 g/kg，SY 中剂量组为 46.02
BIOGLE）模式动物研究有限公司，共 35 只，初始体质 g/kg、SY 高剂量组为 92.04 g/kg，MRL/lpr 组及正常对照
量为（26.6±1.3）g；SPF 级 C57BL/6J 小鼠（8 周龄） 组给予每日 0.5 ml 0.9% 氯化钠溶液灌胃。于小鼠第 12
购于斯贝福（北京）生物技术有限公司，共 6 只，初始 周龄时开始干预，持续干预 14 周，1 次 /d。
体质量为（18.4±0.6）g。将上述 MRL/lpr 小鼠依据随 1.5 检测指标及方法
机数字表法分为MRL/lpr组（n=8）及SY低剂量组（n=9）、 1.5.1 动物体征 观察小鼠取材前毛色、皮损情况、精
SY 中剂量组（n=9）、SY 高剂量组（n=9），C57BL/6J 神状态、脾脏大小、体质量等情况，体质量用电子秤称
小鼠为正常对照组（n=6）。上述动物均饲养于解放军 量。采用体征分数量化动物体征，体征量化评分细则：
总医院医学实验动物中心，SPF 环境下光暗循环 12 h， （1）头面部皮损累及胡须计 1 分，累及皮毛计 1 分，
温度保持 24~26 ℃。实验前动物均适应性喂养 4 周。 累及躯干计 1 分；（2）SY 各剂量组及 MRL/lpr 组脾脏
1.2 药品及药液制备 SY 方：半边莲 20 g，败酱草 20 g， 与同周龄正常对照组脾脏长度均数相比，长度每增加
女贞子 18 g，补骨脂 15 g，王不留行 15 g，三棱 10 g， 0.1 cm 计 0.1 分；（3）实验终点（小鼠 26 周龄）体质
黄连 10 g，白术 10 g。中药饮片购置于北京仟草中药饮 量与起始（小鼠 12 周龄）体质量差值，终点体质量每
片有限公司，饮片生产执行标准为《中华人民共和国药 下降 0.1 g 计 0.1 分，增加 0.1 g 计 -0.1 分。体征量化分
典（2015 年版）》，生产许可证号：京 20150129。将 值越小，表明狼疮损伤越小。
中药饮片混匀，用纯水洗净后再加入纯水煎煮 2 次，冷 1.5.2 尿蛋白检测 于给药第 9、10、11、12、13 周收
冻、干燥、浓缩制成含药浓度为 1 g/ml 汤剂（低剂量）、 取随机尿，采用考马斯亮蓝（CBB 法）检测尿蛋白，
3 g/ml 汤剂（中剂量）、6 g/ml 汤剂（高剂量）。0.9% 根据试剂盒说明操作，使用酶标仪在光密度（OD）
氯化钠溶液为山东齐都药业有限公司生产（国药准字： 595 nm、光径 1 cm 处测定 OD 值，计算尿蛋白浓度。
H37020765）。 1.5.3 尿肌酐检测 于给药第 9、10、11、12、13 周收
1.3 主要试剂与仪器 检测试剂盒：尿蛋白检测试剂 取随机尿，采用苦味酸法检测尿肌酐，根据试剂盒说明
盒（南京建成，C035-2-1），尿肌酐检测试剂盒（Bioassay， 操作，使用酶标仪在 OD 520 nm 处测定 OD 值，计算尿
DICT-500），抗双链 DNA 抗体（anti-dsDNA）检测试 肌酐浓度。结合尿蛋白、尿肌酐结果，计算小鼠尿蛋白
剂盒（Alpha Diagnostic International，5120），抗核抗体 与尿肌酐比值（UPCR）。
（ANA） 检 测 试 剂 盒（Alpha Diagnostic International， 1.5.4 血清 anti-dsDNA、ANA 浓度检测 采用 ELISA
5210）， 免 染 制 胶 试 剂 盒（ 美 国 Bio-Rad 公 司， 法检测 anti-dsDNA、ANA 浓度。干预 14 周后处死动物，
1610185），BCA 蛋白检测试剂盒（Thermo，23225）。 腹主动脉取全血，室温静置 30 min 后，3 000 r/min、
荧 光 抗 体：C3（ 英 国 Abcam 公 司，ab4212）， 免 疫 20 min 离心，收集上层透明血清样本。根据试剂盒说明
球 蛋 白（Ig）G（Jackson，115-025-003），C5b-9 操作，使用酶标仪在 OD 405 nm 处测定 OD 值。
（Bioss，bs-2673R-FITC）。WB 一抗：α 平滑肌肌动 1.5.5 肾脏组织病理检查 干预 14 周后处死小鼠进行
蛋白（α-SMA）（Proteintech，55135）；Ⅰ型胶原蛋 取材，取肾脏组织于 4% 多聚甲醛溶液（4%PFA 溶液）
白（Collagen Ⅰ ）（Proteintech，14695）；Fibronectin 中固定 48 h 后，梯度乙醇脱水，透明，浸蜡，包埋，
（Proteintech，15613）；C3（Proteintech，21773-1- 石蜡切片（2 μm），苏木素 - 伊红染色（HE 染色）及
AP）；C5（GeneTex，GTX33052）；CD35（Genetex， 高碘酸—希夫染色（PAS 染色），封固后采用普通光学
GTX37450）； 甘 油 醛 -3- 磷 酸 脱 氢 酶（GAPDH） 显微镜观察，并通过图像采集系统采集图像。
（Proteintech，10494-1-AP）；WB 二 抗（ 碧 云 天， 1.5.6 C3、免疫球蛋白 G（IgG）、C5b-9 免疫荧光染
A0208）。仪器：真空冷冻干燥饥（上海科兴仪器 色 取肾脏组织于 4%PFA 溶液中固定 48 h 后，梯度蔗
有 限 公 司，ZLGJ-10）， 酶 标 仪（TECAN，SPARK 糖脱水，OCT 包埋，冰冻切片（4 μm），透化、封闭、
30086376），光学显微镜（奥林巴斯，BX53F），共聚 抗体（直标）孵育、洗涤、4'，6- 二脒基 -2- 苯基吲哚
