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阿斯利康药业（中国）有限公司生产。二甲双胍（商品
名：格华止），中美上海施贵宝制药有限公司生产。中
性树胶、无水乙醇与二甲苯由国药集团化学试剂有限公
司提供。乙二胺四乙酸（EDTA）（pH 8.0）抗原修复
液、EDTA（pH 9.0）抗原修复液、柠檬酸（pH 6.0）抗
原修复液、磷酸盐缓冲液（PBS）、自发荧光淬灭剂、
牛血清白蛋白、DAPI 染色剂、一抗、荧光二抗、抗荧
光淬灭封固剂均购自武汉谷歌生物科技有限公司。苏木
素 - 伊红（HE）染色液、分化液、返蓝液、RNA 提取
液及引物均由 Servicebio 厂家提供。
1.3 实验方法
1.3.1 糖尿病动物模型建立、分组及喂药
1.3.1.1 糖尿病动物模型建立 大鼠适应性喂养 1 周后，
建模大鼠给予高糖、高脂饲料继续喂养 6 周，采取腹腔
一次性注射 STZ（40 mg/kg）的方法建造模型，空腹 8 h
后采用尾静脉穿刺法检测大鼠基线血糖水平，若空腹血
糖（FBG）>11.1 mmol/L，则提示成功建立 STZ 诱导的
T2DM 模型。
1.3.1.2 分组及喂药 40 只 Wistar 大鼠随机分为对照组
（C 组）、二甲双胍组（M 组）、瑞舒伐他汀钙低剂量 + 二
甲双胍组（M+RL 组）及瑞舒伐他汀钙高剂量 + 二甲双
胍组（M+RH 组）4 组，每组 10 只。给予各组药物灌胃：
-1
-1
C 组：10 mg·kg ·d 0.9% 氯化钠溶液；M 组：二甲
-1
-1
双胍（200 mg·kg ·d ）；M+RL 组：二甲双胍（200
-1
-1
mg·kg ·d ）混悬液 + 瑞舒伐他汀钙（0.42 mg·kg
-1
-1
-1
·d ）；M+RH 组：二甲双胍（200 mg·kg ·d ）混
-1
-1
悬液 + 瑞舒伐他汀钙（0.83 mg·kg ·d ）。干预 6 周，
末次给药后，次日大鼠腹腔注射 10% 水合氯醛溶液
（1 mg/300 g），切开腹腔并摘取肾脏，留取肾脏组织
标本送检。
1.3.2 HE 染色 HE 染色步骤如下：（1）将肾脏组织
进行石蜡包埋，常规脱蜡至水；（2）苏木素染色 5 min
后，使用蒸馏水冲洗；（3）伊红染色 1 min，再次蒸馏
水浸泡冲洗；（4）脱水，并使用中性树胶封固；（5）
在光镜下对肾脏组织切片进行观察和分析。
1.3.3 高碘酸 - 无色品红（PAS）染色 PAS 染色步骤
如下：（1）将组织薄片常规脱蜡至水；（2）加入高
碘酸染色 10 min，蒸馏水冲洗；（3）用雪弗试剂孵育
15 min，流水冲洗 5 min，组织变为深粉红色后蒸馏水
冲洗；（4）苏木素复染 2 min，梯度乙醇脱水；（5）
二甲苯透明，中性树脂封固。各切片随机挑选至少 3 个
200 倍视野并拍照，应用 Image-Pro Plus 6.0 软件测量区
域紫红色阳性面积百分比。
1.3.4 Masson 染色 Masson 染色步骤如下：（1）肾脏
石蜡切片铬酸钾染色；（2）铁苏木素染核 10 min，蒸
馏水冲洗；（3）丽春红酸性品红染色 10 min，冰醋酸
水溶液短暂浸泡；（4）磷钼酸染色 5 min；（5）苯胺
蓝染色 5 min，进行分化与透明封固。使用 Image-Pro
Plus 6.0 软件检测 200 倍视野区域蓝色胶原纤维面积百
分比。
1.3.5 实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测大鼠
肾脏组织 GLUT4 mRNA 表达水平 取 100 mg 大鼠的肾
脏组织，抽提 RNA，进行反转录，根据 ΔΔCt 法对大
鼠肾脏组织 GLUT4 mRNA 进行基因定量。PCR 扩增引
物序列见表 1。
表 1 PCR 扩增引物序列
Table 1 PCR amplified β-actin and glucose transporter 4 sequences
引物 序列（5'-3'） 长度（bp）
β-actin 上游：TGCTATGTTGCCCTAGACTTCG 240
下游：GTTGGCATAGAGGTCTTTACGG
GLUT4 上游：CCTGCCCGAAAGAGTCTAAAGC 316
下游：CTAAGAGCACCGAGACCAACG
注：GLUT4= 葡萄糖转运蛋白 4
1.3.6 Western-blotting 法 检 测 药 物 对 大 鼠 肾 脏 组 织
GLUT4 蛋白表达的影响 将肾脏组织彻底匀浆并完全裂
解，收集总蛋白溶液，按 4∶1 的比例加入 5× 蛋白上
样缓冲液，沸水浴变性，使用十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯
酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）后，通过 Western-blotting
法检测肾脏组织中 GLUT4 蛋白表达水平。
-1 1.4 统计学方法 采用 SPSS 22.0 软件进行统计学分析，
计量资料以（ ±s）表示，多组间比较采用单因素方差
分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验。以 P<0.05 为差
异有统计学意义。
2 结果
2.1 HE 染色结果 HE 染色可见：C 组大鼠肾脏组织
无病理样改变，肾小管排列紧密，肾小球未见明显异常。
M 组大鼠肾小球萎缩，肾小管数量减少，肾脏组织内可
见炎性细胞浸润，伴有间质水肿与出血，肾实质可见褐
色素沉着。M+RL 组肾小球及肾间质均有大量炎性细胞
浸润，肾小管轻度水肿，管腔内可见嗜伊红蛋白样物质，
胞核固缩深染，肾小管间质血管淤血。M+RH 组肾小管
扩张，部分肾小球肥大，基膜增厚（图 1）。
2.2 PAS 染色结果 PAS 染色可见：C 组大鼠肾小球均
匀光滑，肾小管基膜及系膜基质无明显病理性改变，肾
小球血管袢薄，未见肾小球肥大及肾小管管型。M 组大
鼠肾组织损伤明显，肾小球基底膜明显增厚，系膜细胞
及基质增多，部分肾小管出现空泡样病变，管腔扩张，
可见肾间质水肿。M+RL 组可见肾小管毛细血管壁增厚，
可见毛细血管袢塌陷，肾小管基底膜增厚，可见肾小管
管型。M+RH 组肾小球基底膜较 C 组增厚，肾小管管腔
扩张，系膜细胞明显增多（图 2）。