Page 34 - 2023-03-中国全科医学
P. 34

2023年1月   第26卷   第3期                                 http: //www.chinagp.net   E-mail: zgqkyx@chinagp.net.cn  ·283·

           明显局限性，但随着 NGS 及数字 PCR（dPCR）等技术                      细胞肺癌患者唾液样本中利用上述技术检测到循环肿瘤
           的进步，ctDNA 检测的灵敏度也在逐渐提高。                             DNA（sctDNA）EGFR 突变，灵敏度为 100%。另一些
           2.1.3 外泌体 JOHNSTONE 等      ［18］ 在研究网织红细胞            肿瘤生物化学指标与肺癌患者的生存率显著相关                     ［31］ ，
           的成熟过程时首次发现并命名外泌体。外泌体是一种                             例如咪唑化合物（ICs）浓度和唾液乳酸脱氢酶（LDH）
           球形囊泡，直径为 40~100 nm，密度为 1.13~1.19 g/ml，              活性，这两个参数的组合被用作评估肺癌预后及存活
           其内主要核酸包含 microRNA（miRNA）、tRNA 和长                    率更为有效。对于预后良好（ICs<0.311 mmol/L 和 LDH
           非编码 RNA（lncRNA），以及大量片段化的信使 RNA                      >1 133 U/L）的患者，1 年、3 年和 5 年生存率比预后不
           （mRNA）。外泌体的分离方法主要有基于物理（如大                           良的患者均高 2 倍。而 C 反应蛋白（CRP）水平可能也
           小、密度和分子量）特性、沉淀、微流体、免疫亲和捕                            会随着肿瘤大小和区域转移而升高。
           获的技术，目前超速离心和商用试剂盒提取法是分离外                            2.3 尿液 经治疗后 MRD 血浆中 ctDNA 和 CTC 的含
           泌体最广泛使用的常规方法            ［19］ 。尽管所有类型的细胞             量较低，在连续监测病灶进展过程中需要提取相对大容
           会释放出外泌体，但肿瘤细胞中的外泌体非常丰富。研                            量的血液，尽管是微创但患者仍然会感觉到不适。研究
           究表明肿瘤细胞源性外泌体在肿瘤生物学过程中起着重                            表明外周血中的 cfDNA 能够通过肾屏障并经过尿液排
           要作用，其负责促进受体细胞的血管生成、侵袭和增殖，                           泄 ［32］ ，CHEN 等 ［33］ 对非小细胞肺癌患者匹配的 3 ml
           通过将其内容物转移到肺癌微环境中的靶细胞参与肺癌                            外周血和 8 ml 尿液样本共计 150 份进行分析，从中获
           的形成和进展      ［20］ 。癌细胞外泌体包含多种与癌症相关                   得的 cfDNA 数量没有统计学差异。且尿液易于储存和
           的蛋白质，例如表皮生长因子受体（EGFR）是肺癌外                           运输，更易于提取大容量样本，从尿液样本中获取关键
           泌体中的主要膜结合蛋白，从肺癌细胞中提取的外泌体                            疾病信息的可能性为补充传统的肿瘤取样方法提供了
           中约有 80% 呈 EGFR 阳性     ［21］ ，而肿瘤源性外泌体衍生              更多选择。MRD 阳性意味着癌症治疗后血液中可检测
           的 miRNA 也可能是影响非小细胞肺癌患者生存率的独                         到来自肿瘤的 DNA，那么尿液中检测到的 DNA 水平也
           立预测因子     ［22］ 。RABINOWITS 等  ［23］ 评估了血浆样本          可以类似地指示肿瘤负担相关性。在先前的报道中利
           循环肿瘤外泌体水平对 27 例肺腺癌患者和 9 例健康对                        用尿液 DNA 追踪肿瘤特异性突变并针对耐药性给予个
           照的诊断和预后潜力，发现腺癌患者的外泌体水平（平                            体化治疗，临床应用被证明适用于晚期非小细胞肺癌患
           均 2.85 mg/ml）、外泌体 miRNA 浓度（158.6 ng/ml）均            者 ［34］ 。LI 等 ［35］ 发现治疗后可检测到尿 ctDNA 的存在
           高于健康对照（平均 0.77 mg/ml、68.1 ng/ml）。                   与肺癌患者的疾病复发明显相关，尿 ctDNA 检测不到
           2.2 唾液 唾液由唾液腺中的腺泡细胞产生，腺泡                            的患者有较好的无病生存率，可检测到 ctDNA 的患者 3、
           细胞具有很高的渗透性，且周围有丰富的毛细血管，                             6 和 9 个月复发概率对应为 15.6%、6.6% 和 5.1%。表明
           使血液中的分子能够与相邻唾液细胞中的分子自由交                             尿 ctDNA 对疾病复发风险有一定的前瞻性，尤其是对
           换 ［24］ ，目前血液中大约 40% 的肿瘤标志物也可以在唾                     突变 DNA 检测不到的患者进行甄别具有良好的临床实
           液中找到    ［25］ 。加之唾液的收集速度快、简单、便宜、                     用性。LEE 等    ［36］ 指出在治疗后阶段 EGFR 突变持续阳
           无创，表明唾液可以被视为一种理想的液体活检标本。                            性的 NSCLC 患者可能存在残余病灶，需要进一步治疗
           GU 等 ［26］ 首次将血浆 CTC 和唾液 mRNA 生物标志物联                 或加强疾病复发监测。特别是 T790M 突变与疾病进展
           合应用于非小细胞肺癌的无创检测，在区分早期肺癌                             时间缩短和总体生存率降低密切相关。CHEN 等                   ［33］ 对
           患者和健康对照组的研究中其灵敏度和特异度分别高                             150 例非小细胞肺癌患者分组后发现，尿液 DNAT790M
           达 92.1% 和 92.9%。非小细胞肺癌患者和健康人群之                      阳性组患者的总体生存结果明显最差，中位生存率为
           间唾液 cfDNA 的定量或浓度无显著差异               ［27］ 。然而，       30 个月，T790M 阴性组的中位生存率为 34 个月，进一
           血浆 cfDNA 和唾液 cfDNA 之间 EGFR 突变的一致性为                  步验证了尿液 DNA 在治疗后患者风险分层和疾病监测
           83.78%，scfDNA 能够作为基因突变的补充            ［28］ 。EGFR     中的临床实用性。
           是一种在 NSCLC 中频繁表达的膜受体，其影响 NSCLC                      2.4 痰液 美国国家癌症研究所（NCI）               ［37］ 进行了一
           细胞的增殖、血管生成和 MRD 复发及化疗耐药性，并                          项肺癌的低剂量螺旋计算机断层扫描和痰细胞学双重筛
           促进 NSCLC 细胞的转移       ［29］ 。频繁对术后肺癌患者进               查研究，双重筛查诊断的 90 例患者中有 18 例（20%）
           行血液活检监测 EGFR 突变是不切实际的，而唾液活检                         痰标本呈癌症阳性，但影像学检查呈阴性，表明痰液在
           恰可以为肺癌 MRD 提供另一个有希望的诊断补充。加                          诊断临床上处于缓解期或隐匿期的癌症相比较影像学
           州大学洛杉矶分校（UCLA）牙科学院开发的电场诱导                           具有时间优越性，但因为大多数肺癌患者痰液样本量
           释放和测量（EFIRM）技术可以检测肺癌患者体液中表                          较少，致使其包含的肿瘤细胞数量有限，加之痰液中
           皮生长因子受体（EGFR）突变。LI 等             ［30］ 在 13 例非小      的黏性黏液成分使得肿瘤源性的 DNA 提取更加困难。
   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39