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           本研究基于此,以阳性药物 5- 氨基水杨酸(5-ASA)                        情况变化(体质量、便血、腹泻、背毛无光泽、拱背、
           为实验对照,通过 FMT 治疗普通型溃疡性结肠炎模型                          懒动及肛温升高等)来判断造模是否成功。
           (CUCM)与湿热型溃疡性结肠炎模型(DUCM),验                          1.3.3 粪菌制备 取正常对照小鼠的 5 g 新鲜晨便标本
           证其疗效,通过治疗前后疾病活动指数、肠组织 HE 染                          溶于 10 ml 无菌 PBS 中充分混匀,分别用 2.0、1.0、0.5、
           色、肠组织透射电镜、血常规及菌群多样性分析等探究                            0.25 mm 的不锈钢筛过滤,6 000×g 离心 15 min,取菌体,
           FMT(新金汁)的中药性味。                                      用无菌PBS清洗3次,重悬于25 ml PBS中4 ℃冰箱保存。
           1 材料与方法                                             1.4 实验分组 于 2019 年 12 月 9—28 日,根据造模
           1.1 实验动物 雄性 SPF 级 C57BL/6 小鼠(4 周龄):                 需求进行针对性造模,再分为 7 组,每组各 5 只小鼠。
           湖南斯莱克景达实验动物有限公司,许可证号:SCXK                           1.4.1 正常对照组(Control 组) Control 组不做任何
           (湘)2019-0004,平均体质量(18.0±1.2)g。本研究                   干预处理,给予小鼠自由饮用正常水,普通饲料喂养,
           经江西中医药大学医学伦理审查委员会审批通过。                              常温、常态下饲养(温度、湿度设置同 CUCM 组),
           1.2 实验试剂与仪器 葡聚糖硫酸钠(DSS)(9011-                       不做其他特殊处理。
           18-1,上海源叶生物科技有限公司);5-ASA(货号:                        1.4.2 CUCM 组 CUCM 造模成功后,常温、常态下采
           89-57-6,上海源叶生物科技有限公司);高脂高糖饲                         用普通饲料、正常饮水饲养,采用磷酸盐缓冲液(PBS)0.2
           料(配方:糖 15%、猪油 10%、胆固醇 4%、胆盐 0.3%、                   ml/ 次对小鼠进行灌肠,1 次 /2 d,持续 10 d,共计 5 次。
           蛋黄粉 10%、基础饲料 60.7%,南京盛民科研动物养殖                       1.4.3 CUCM+FMT 组 CUCM 造模成功后,常温、常
           场);便隐血(OB)试剂(B200101,珠海贝索生物);                       态下采用普通饲料、正常饮水饲养,给予制备的粪菌液
           水合氯醛(119957,上海展云化工有限公司);异氟                          0.2 ml 对小鼠进行灌肠,1 次 /2 d,持续 10 d,共计 5 次。
           烷(S10010533,上海玉研科学仪器有限公司);干扰                        1.4.4 CUCM+5-ASA 组 CUCM 造模成功后,常温、常
           素 γ(IFN-γ)PE(505808,Biolegend);CD4 APC-             态下采用普通饲料、正常饮水饲养,按 0.195 g/kg 的剂
           CY7(100460,Biolegend);白介素(IL)-4 PE(504104,          量,药物浓度为 0.019 5 g/ml,即 20 g 小鼠灌肠 0.2 ml,
           Biolegend);小鼠 IL-2 试剂盒(MM-0701M1);小鼠                1 次 /2 d,持续 10 d,共计 5 次。
           IL-4 试剂盒(MM-0165M1);苏木素染液(ZLI-9610,                 1.4.5 DUCM 组 DUCM 造模成功后,常温、常态下采
           北京中杉金桥生物技术有限公司);伊红染色液(G1100,                        用普通饲料、正常饮水饲养,采用 PBS 0.2 ml/ 次对小
           Solarbio);超净高级封片胶(YZB,BASO);Scott 蓝                 鼠进行灌肠,1 次 /2 d,持续 10 d,共计 5 次。
           化液(G1865,Solarbio);人工气候箱(PRX-80A,江                  1.4.6 DUCM+FMT 组 DUCM 造模成功后,常温、常
           苏天翎仪器有限公司);动物呼吸麻醉机(ABM-100,                         态下采用普通饲料、正常饮水饲养,给予制备的粪菌液
           上海玉研科学仪器有限公司);透射电镜(JEM-1230,                        0.2 ml 对小鼠进行灌肠,1 次 /2 d,持续 10 d,共计 5 次。
           JEOL);多功能酶标仪(S/N502000011,TECAN);                   1.4.7 DUCM+5-ASA 组 DUCM 造模成功后,常温、常
           显微镜(CX41 OLYMPUS);切片机(BQ-318D,伯纳);                  态下采用普通饲料、正常饮水饲养,按 0.195 g/kg 的剂
           动物血液细胞分析仪(XFA6030 普朗医疗)               [10] 。        量,药物浓度为 0.019 5 g/ml,即 20 g 小鼠灌肠 0.2 ml,
           1.3 模型建立                                            1 次 /2 d,持续 10 d,共计 5 次。
           1.3.1 CUCM 将小鼠适应性饲养 7 d 后,置于鼠笼饲                     1.5 动物取样 给药结束后,将各组大鼠用 10% 水合
           养 IVC 系统(设置参数如下:温度 20 ℃、湿度 45%,                     氯醛按 400 mg/kg 腹腔注射麻醉,打开动物的腹腔及胸
           每日持续 12 h)中饲养,给予普通饲料喂养并给予小鼠                         腔;将结肠和盲肠取出,表面血迹冲洗干净,用无菌棉
           自由饮含 2% DSS 蒸馏水,连续饲养 10 d 即可。                       签挤出肠道内容物,采用 16S rRNA 高通量测序技术测
           1.3.2 DUCM 将小鼠适应性饲养 7 d 后,置于鼠笼饲                     定菌群多样性。内容物取出后切去盲肠,将剩余的结肠
           养 IVC 系统(设置参数如下:温度 36 ℃、湿度 80%,                     和直肠分为 3 份,分别用于 HE 染色、透射电镜检测、
           每日持续 12 h)中饲养,给予高脂高糖饲料(配方:糖                         流式细胞检测。
           15.0%、猪油 10.0%、胆固醇 4.0%、胆盐 0.3%、蛋黄                  1.6 HE 染色 取出各组组织样品流水冲洗数小时,经
           粉 10.0%、基础饲料 60.7%),并给予小鼠自由饮含 2%                    70%、80%、90% 各级乙醇溶液脱水,纯乙醇、二甲苯
           DSS 蒸馏水,连续饲养 10 d 即可。                               等量混合液 15 min,二甲苯Ⅰ 15 min、Ⅱ 15 min(至透
               造模后,CUCM 与 DUCM 分别取 2 只小鼠进行观察,                  明为止)。放入二甲苯和石蜡各半的混合液 15 min,再
           取样进行模型验证,通过小鼠疾病活动指数评分(体质                            放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ透蜡各 50~60 min。石蜡包埋,切片。
           量下降分数、大便性状分数、便血分数)和小鼠的一般                            将石蜡切片进行烤片,然后脱蜡,水化。将已入蒸馏水
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