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           的切片放入苏木素水溶液中染色 3 min，盐酸乙醇分化                         扩增。PCR 扩增产物通过 2% 琼脂糖凝胶电泳进行检测，
           液分化 15 s，稍水洗，返蓝液返蓝 15 s，流水冲洗，伊                      并对目标片段进行切胶回收，将 PCR 扩增回收产物进
           红染色 3 min，流水冲洗，脱水，透明，封片，镜检。                         行荧光定量，之后进行高通量测序。使用 QIIME 软件，
           1.7 透射电镜观察 各组组织样品 2.5% 戊二醛固定                        调用 UCLUST 这一序列比对工具，高通量测序所得的序
           2 h 以上，用 0.1 mmol/L PBS 漂洗，1% 锇酸固定液固定               列按 97% 的序列相似度进行归并和 OTU 划分，并选取
           2 h，0.1 mmol/L磷酸漂洗梯度乙醇（50%~90%）溶液脱水，                每个 OTU 中丰度最高的序列作为该 OTU 的代表序列，
           再丙酮脱水，包埋固化，切片切成厚度为 70 nm 薄片。                        然后比对 RDP（Ribosomal Database Project）数据库得到
           3% 醋酸铀 - 枸橼酸铅双染，透射电镜观察。                             分类鉴定结果。
           1.8 流式细胞检测 辅助性 T 细胞（Th）1 细胞检测：                      1.12 统计学方法 采用 SPSS 19.0 软件进行统计学分
           各组取 100 μl 血液至于 12 孔板中，加入 150 μl 1640               析，计量资料以（ ±s）表示，多组间比较采用单因素
           完全培养基，加入1 μl PMA/Ionomycin mixture佛波酯/离             方差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验。以 P<0.05
           子霉素混合物，放入培养箱中孵育 30 min 后加入 1 μl                     为差异有统计学意义。
           BFA/Monensin Mixture，放入培养箱中孵育 24 h。结束               2 结果
           后，将血液转至 EP 管中离心，弃 150 μl 上清，将细                          各组小鼠均造模成功。
           胞吹匀加入 CD4 APC-CY7 各 5 μl，避光孵育 15 min，               2.1 HE 染色分析 各组小鼠肠组织 HE 染色显示：
           1 ml PBS，400×g 离心 5 min 洗 2 次，弃上清。加入                Control 组大鼠结肠黏膜完整，腺体排列整齐，无炎性细
           500 μl Fixation and Permeabilization Solution 避 光 固 定  胞浸润，层次紧密，结构清晰；CUCM 组与 DUCM 组肠
           破 膜 40 min，400×g 离 心 5 min 后， 加 入 1 ml 1×BD         黏膜表面出现不同程度的缺损或脱落坏死，部分形成溃
                    TM
           Perm/Wash  buffer，清洗 2 次，再 100 μl 1×BD Perm/        疡，隐窝消失，固有层大量炎性细胞浸润，黏膜肌层增
               TM
           Wash  buffer 重悬细胞，加入 5 μl IFN-γ PE，避光孵              厚水肿，黏膜下层血管扩张，较多红细胞、嗜酸粒细胞
                                        TM
           育 15 min。1 ml 1×BD Perm/Wash  buffer，清洗 2 次，        浸 润；CUCM+FMT 组、CUCM+5-ASA 组、DUCM+FMT
                                   TM
           再 500 μl 1×BD Perm/Wash  buffer 重悬细胞，上流式            组、DUCM+5-ASA 组肠黏膜基本完整，极少数仍见残
           仪检测。Th2 细胞检测步骤同上，CD4 APC-CY7 孵育                     缺断裂，腺体增生，排列尚整齐，杯状细胞增多，出血
           重悬后，Th2 检测加入 IL-4 PE 孵育。                            点消失，可见少量炎性细胞浸润，并且 DUCM+FMT 组
           1.9 血常规检测 取各组血液充分抗凝后，室温条件                           与 CUCM+FMT 组相比，前者腺体较后者排列整齐并紧
           下，采用动物血液细胞分析仪 4 h 内完成血常规上机检                         密，残缺断裂也较后者少，见图 1。
           测，主要检测白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、                        2.2 透射电镜分析 各组肠组织透射电镜超微结构显
           血小板计数（PLT）和血红蛋白（HGB）。                               示：Control 组微绒毛形态规则，排列整齐，较多杯状细
           1.10 疗效指数评估 比较各组 UC 小鼠 FMT 干预前后                     胞，线粒体丰富，嵴结构清楚，粗面内质网未见改变；
           疾病活动指数的变化，疾病活动指数从体质量变化（体                            CUCM 组与 DUCM 组上皮细胞表面微绒毛稀疏，长短不
           质量不变：0 分，体质量下降 1%~5%：1 分，体质量下                       一，形态不规则，细胞连接间隙增宽，杯状细胞减少，
           降 6%~10%：2 分，体质量下降 11%~15%：3 分，体质                   胞浆内有空泡，线粒体肿胀，部分嵴消失，个别内质网
           量下降 >15%：4 分）、大便性状（大便正常：0 分，大                       扩张或呈空泡变化；CUCM+FMT 组、CUCM+5-ASA 组、
           便松散：2 分，腹泻：4 分）、便血（无便血：0 分，                         DUCM+FMT 组、DUCM+5-ASA 组微绒毛较为致密，形
           隐血阳性：2 分，显性出血：4 分）3 方面进行综合评                         态正常，杯状细胞数目较多，线粒体轻微肿胀，粗面
           价。疾病活动指数 =（体质量下降分数 + 大便性状分数                         内质网病变不明显，并且 DUCM+FMT 组与 CUCM+FMT
           + 便血分数）/3。计算 CUCM 及 DUCM 的疗效指数，依                    组相比，前者的微绒毛较后者紧密，杯状细胞也较后者
           据尼莫地平法：疗效指数 =（治疗后疾病活动指数 - 治                         多，见图 2。
           疗前疾病活动指数）/ 治疗前疾病活动指数 ×100%，比                        2.3 流式细胞检测 各组小鼠 Th1、Th2 细胞含量比较，
           较 FMT 干预 CUCM 及 DUCM 的疗效指数差别。                       差异均有统计学意义（P<0.001），见表 1。
           1.11 16S rRNA 高通量测序技术测定菌群多样性 各组                     2.4 血常规检测 各组小鼠 WBC、RBC、PLT、HGB
           小鼠肠道内容物过滤后，分为 3 个测量组，分别为 1、2、                       比较，差异均有统计学意义（P<0.001），见表 2。
           3，提取总 DNA 分光光度计进行定量。通常以微生物核                         2.5  疗 效 指 数 分 析 CUCM+FMT 组 疗 效 指 数 为
           糖体 RNA 等能够反映菌群组成和多样性的目标序列为                          （-31.03±4.71）%，CUCM+5-ASA 组 疗 效 指 数 为
           靶点，根据序列中的保守区域设计相应引物，进行 PCR                          （-62.53±7.53）%，DUCM+FMT 组 疗 效 指 数 为
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