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〔（48.0±5.3）vs（60.1±0.8）〕（χ =7.757，P=0.005）. Multivariate Cox regression analysis indicated that the 153A/G
polymorphism in mitochondrial D-Loop was a predictor of age at onset of gastric cancer〔HR=0.323，95%CI（0.140，0.745），
P=0.008〕. Conclusion The 153A/G polymorphism in mitochondrial D-Loop may be used as a novel predictor of the age at
onset of gastric cancer. Analyzing the SNPs in mitochondrial D-Loop may contribute to early identification of gastric cancer.
【Key words】 Stomach neoplasms；DNA，mitochondrial；D-Loop；Polymorphism，single nucleotide；Age of
onset；Sex factors

胃癌（gastric cancer）是世界范围内常见的恶性肿 1.2.1 资料收集 收集患者的临床特征，包括年龄、性
瘤之一，发病率居恶性肿瘤第 5 位，死亡率居恶性肿瘤 别、肿瘤大小、肿瘤部位、分化程度、TNM 分期等。
第 4 位，严重威胁着人们的生命健康 ［1］ 。中国更是胃 采集所有患者空腹外周静脉血，即刻放置在 -4 ℃冰箱
癌大国，据 2020 年研究数据表明，中国每年新发病例 中恒温保存。
45.7 万，死亡病例 30.0 万，无论发病人数还是死亡人数， 1.2.2 mtDNA 提取、PCR 扩增及基因测序 采用美国
均居全球第 1 位，防控形势严峻 ［2］ 。目前研究表明， Promega 公司生产的全血线粒体萃取试剂盒迅速提取
大多数国家 40 岁及以上人群的胃癌发病率在下降，而 mtDNA 后置于 -80 ℃恒温保存。经定量鉴定合格后的
在 40 岁以下人群中胃癌发病率逐渐上升，且年轻胃癌 DNA，采用聚合酶链反应（PCR）法扩增目的片段，上
患者具有起病隐匿、进展迅速、淋巴转结移早、腹膜转 游引物为：5'-CCCCATGCTTACAAGCAAGT-3'，下游引
移率高、预后差等特点，给家庭、社会造成重大影响 ［3-4］ 。 物 为：5'-GCTTTGAGG AGGTAAGCTAC-3'。 应 用 PCR
因此迫切需要探索预测胃癌发病年龄的相关因素及机 预混试剂（Promega，Madison，WI，美国）、PCR 仪（AS
制，以期在特定人群中采取更多的预防策略，降低胃癌 Applied Biosystems 9902，美国）进行分析，PCR 具体反
发病率。 应条件为：95 ℃预变性 2 min，95 ℃变性 30 s，55 ℃
胃癌的形成是一个多基因、多因素参与的过程， 退火 30 s，72 ℃延伸 1 min，38 个循环，最后于 72 ℃
近年来发现胃癌的发生不仅与核基因的变化相关，还 延伸 5 min。PCR 扩增产物经琼脂糖凝胶纯化后，采用
与细胞核外遗传物质线粒体 DNA（mitochondrial DNA， ABI PRISM® BigDye Terminator v3.1 循环测序反应试剂盒
mtDNA）的突变及单核苷酸多态性（single nucleotide 进行 DNA 测序。同一标本采用双向、测通、重复测序。
polymorphisms，SNPs）关系密切。人类 mtDNA 是哺乳 1.3 观察指标 分析不同临床特征胃癌患者发病年龄，
动物细胞内唯一的核外遗传物质，由于其特殊的性质， 胃癌患者 mtDNA D-Loop 区 SNPs 与发病年龄之间的关
例如缺乏组蛋白的保护以及修复系统不完善，与核内基 系，以及胃癌患者发病年龄影响因素。
因组相比，mtDNA 更容易发生突变 ［5-6］ 。D- 环区（D-Loop 1.4 统计学方法 采用 SPSS 24.0 统计学软件进行数据
区）作为 mtDNA 转录调控位点，具有高度不稳定性， 分析。符合正态分布的计量资料以（ ±s）表示；计
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在包括胃癌等多种恶性肿瘤的研究中发现，D-Loop 区 数资料以相对数表示，组间比较采用 χ 检验；采用
是 mtDNA 突变和多态性的热点区域 ［7-9］ 。这些突变和 Kaplan-Meier 法绘制胃癌患者发病年龄的生存曲线，生
多态性可能抑制线粒体电子传递链的传导，导致大量活 存曲线比较采用 Log-rank 检验；胃癌患者发病年龄的
性氧（reactive oxygen species，ROS）释放，不断刺激细 影响因素分析采用多因素 Cox 比例风险回归分析。以
胞增殖分化，最终诱发肿瘤 ［10］ 。为进一步防控胃癌， P<0.05 为差异有统计学意义。
本研究对胃癌患者外周血中的 mtDNA D-Loop 区进行测 2 结果
序分析，分析其与胃癌患者发病年龄的关系，以期寻找 2.1 不同临床特征胃癌患者发病年龄比较 150 例胃癌
预测发病年龄的指标，从而针对特定人群进行早期预警 患者中，<40 岁 6 例（4.0%），40~50 岁 19 例（12.7%），
及干预。 51~60 岁 49 例（32.7%），>60 岁 76 例（50.6%）。 不
1 对象与方法 同性别、肿瘤大小、肿瘤部位、TNM 分期患者发病年
1.1 研究对象 选取 2007 年 7 月至 2008 年 12 月在河 龄比较，差异无统计学意义（P>0.05）；不同分化程度
北医科大学第四医院消化内科就诊并经胃镜病理证实的 患者发病年龄比较，差异有统计学意义（P<0.05），见
各期胃癌患者 150 例作为研究对象。排除标准：合并其 表 1。
他部位肿瘤；病理类型为鳞癌、腺鳞癌、神经内分泌癌 2.2 胃癌患者 mtDNA D-Loop 区 SNPs 与发病年龄之间
等其他病理类型。本研究经河北医科大学第四医院伦理 的关系 将 150 例胃癌患者 mtDNA D-Loop 区的测序结
委员会批准（MEC2008-2），患者均对本研究知情同意。 果与人类 mtDNA 文库记录的剑桥序列进行比对，共发
1.2 研究方法 现 106 个多态位点，将最小等位基因频率 <5% 的位点