背景 近年来,枢经推拿在治疗神经病理性疼痛方面展现出较好的疗效,但其具体作用机制尚未充分阐明。
目的 以L5脊神经结扎而成的神经病理性疼痛大鼠模型为观察对象,根据各项研究指标观察枢经推拿对大鼠的镇痛作用,探讨其是否通过影响长链非编码RNA-生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA-GAS5)进而调控脊髓背角神经元凋亡达到镇痛效果。
方法 实验于2021年1—6月在广西中医药大学、广西大学动物医学实验中心完成。选取健康雌性SD大鼠120只,按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、假推拿组和枢经推拿组,每组24只;模型组、假手术组、假推拿组和枢经推拿组通过结扎L5脊神经来制备神经病理性疼痛大鼠模型。造模24 h后,假手术组暴露L5脊神经几分钟,不予结扎,逐层缝合关闭伤口;假推拿组轻抚大鼠双后肢18 min;枢经推拿组用自备按摩仪循序刺激两侧足少阳胆经上的环跳、阳陵泉、悬钟三穴,刺激力量为5 N,频率2 Hz,每穴、每法干预1 min,双侧6个穴位,3种手法,共计18 min;正常组、模型组正常喂养及观察,不施加任何干预。于造模前及造模后1、3、7、14 d分别进行行为学检测(机械缩足反射阈值、热缩足反射潜伏期);分别于干预7、14 d,随机抽取12只进行取材检测脊髓组织中介导TLR8/ERK信号通路相关蛋白表达情况〔脊髓组织B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Caspase-3、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、Toll样受体8(TLR8)蛋白表达水平,LncRNA-GAS5、miR-21基因表达水平)〕。
结果 (1)行为学方面,模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠造模后1、3、7、14 d机械缩足反射阈值均低于正常组(P<0.05);假手术组、假推拿组、枢经推拿组的机械缩足反射阈值在造模后14 d均高于模型组(P<0.05);假手术组、枢经推拿组造模后7、14 d机械缩足反射阈值高于假推拿组(P<0.05)。假手术组、枢经推拿组在造模后1、3、7 d热缩足反射潜伏期均低于正常组(P<0.05);假手术组、假推拿组、枢经推拿组在造模后7、14 d热缩足反射潜伏期均长于模型组(P<0.05);假手术组、枢经推拿组在造模后14 d热缩足反射潜伏期长于假推拿组(P<0.05)。(2)信号通路相关蛋白以及基因表达水平方面,造模后7 d,正常组Bcl-2蛋白表达水平低于其余各组(P<0.05);枢经推拿组的Bcl-2蛋白表达水平高于模型组,Caspase-3、ERK、TLR8蛋白表达水平均低于模型组(P<0.05);枢经推拿组的Bcl-2、Caspase-3、ERK、TLR8蛋白表达水平低于假手术组、假推拿组(P<0.05);造模后14 d,枢经推拿组的Bcl-2蛋白表达水平仍高于模型组,Caspase-3、TLR8蛋白表达水平仍低于模型组,而ERK蛋白表达水平高于模型组(P<0.05)。造模后7d,假推拿组和枢经推拿组LncRNA-GAS5基因表达水平均高于模型组,miR-21基因表达水平均低于模型组(P<0.05);枢经推拿组LncRNA-GAS5基因表达水平高于假推拿组,miR-21基因表达水平低于假推拿组(P<0.05);造模后14 d,模型组LncRNA-GAS5基因表达水平低于正常组,枢经推拿组与假推拿组lncRNA-GAS5基因表达水平高于模型组(P<0.05);枢经推拿组与假推拿组miR-21基因表达水平高于模型组(P<0.05)。
结论 枢经推拿手法对神经病理性疼痛大鼠起到一定的镇痛效果,初步推测镇痛作用机制可能是通过升高LncRNA-GAS5的表达来吸附miR-21介导TLR8/ERK通路相关蛋白抑制神经元凋亡,虽然其具体机制未明确证实,但LncRNA-GAS5有望成为以后治疗神经病理性疼痛的新靶点。