摘要： 观察益心解毒方含药血清对NOX2、NOX4 亚基过表达和小干扰RNA（RNAi）导致的H9C2心肌细胞还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶活性的变化，探讨益心解毒方的作用机制。方法 采用正常雄性Sprague-Dawley大鼠16只，构建针对NOX2、NOX4亚基的过表达质粒和RNAi质粒。采用转染试剂瞬时转染H9C2心肌细胞，流式细胞术检测转染率，转染24 h后分组（正常H9C2细胞组、过表达组、H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方中剂量组、益心解毒方低剂量组）给予不同剂量的含药血清干预,24 h后检测NADPH氧化酶活性。结果 转染NOX2亚基过表达质粒的各组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。其中，过表达组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与正常H9C2细胞组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方中剂量组与过表达组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与H9C2转阴性对照质粒组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与RNAi质粒组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；益心解毒方中剂量组与益心解毒方高剂量组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；益心解毒方低剂量组与益心解毒方中剂量组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。转染NOX4亚基过表达质粒的各组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。其中，过表达组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与正常H9C2细胞组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；H9C2转阴性对照质粒组、RNAi质粒组、益心解毒方中剂量组、益心解毒方低剂量组与过表达组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；RNAi质粒组、益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与H9C2转阴性对照质粒组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；益心解毒方高剂量组、益心解毒方低剂量组与RNAi质粒组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；益心解毒方中剂量组与益心解毒方高剂量组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；益心解毒方低剂量组与益心解毒方中剂量组NADPH氧化酶活性比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 NOX2、NOX4亚基的过表达可以提高NADPH氧化酶活性，而RNAi表达可以沉默NOX2、NOX4亚基，从而降低NADPH氧化酶活性，益心解毒方不会直接影响NADPH氧化酶活性。实验研究表明干预和抑制NOX2、NOX4亚基的NADPH氧化酶活性调控环节，降低心肌活性氧（ROS）水平，保护心肌细胞，改善心功能，可能是益心解毒方发挥药效的重要机制。