中国全科医学 ›› 2015, Vol. 18 ›› Issue (2): 176-179.DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2015.02.013

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白假丝酵母菌最优化RNA提取策略的探索

李赛男,祁文瑾   

  1. 650032云南省昆明市,昆明医科大学第一附属医院妇产科
  • 出版日期:2015-01-15 发布日期:2015-01-15
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目(81160076)

  • Published:2015-01-15 Online:2015-01-15

摘要: 目的  探索白假丝酵母菌总RNA简单、快捷、高效的提取方法。方法  选取昆明医科大学第一附属医院妇产科门诊2011年7月—2013年3月有临床症状且阴道分泌物镜检阳性的外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者的白假丝酵母菌40株,选用不同时间与温度组合下的4种溶壁酶(Lyticase)破壁方案(A方案:37 ℃、12 h,B方案:25 ℃、12 h,C方案:37 ℃、24 h,D方案:25 ℃、24 h)进行RNA提取,将所得RNA进行荧光定量PCR(qPCR)反应验证RNA的浓度及纯度,并进行管家基因18S rRNA的检测。结果  D方案提取获得的RNA浓度高于A、B、C方案(P<0.05)|B方案提取获得的RNA浓度高于A、C方案(P<0.05)|而A、C两方案提取获得的RNA浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。B、D方案获得的RNA纯度高于A、C方案(P<0.05)|但A、C方案获得的RNA纯度比较,差异无统计学意义(P>0.05)|B方案提取获得的RNA纯度高于D方案(P<0.05)。A、B、C、D方案提取的RNA扩增产物Ct转化值比较,差异有统计学意义(P<0.05)|其中B、D方案qPCR扩增产物Ct转化值高于A、C方案(P<0.05)|但B、D方案及A、C方案之间的qPCR扩增产物Ct转化值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。管家基因18S rRNA的引物扩增出的产物片段大小为150 bp。结论  以Lyticase破壁提取白假丝酵母菌具有简单易行及RNA产量高、纯度好的优点,值得临床推广应用。

关键词: 白假丝酵母菌, RNA, 聚合酶链反应, 溶壁酶