摘要： 目的 研究肝细胞生长因子（HGF）诱导敏感非小细胞肺癌（NSCLC）细胞对厄洛替尼耐药的机制，观察c-Met及其下游信号通道蛋白是否参与HGF诱导不同基因型NSCLC细胞对厄洛替尼耐药。方法 2014年1月-2015年1月，选择人NSCLC细胞株PC-9〔表皮生长因子受体（EGFR）突变型，敏感株〕、H292（EGFR野生型，敏感株）及人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞，通过ELISA法检测PC-9、H292、MRC-5细胞培养上清液中HGF水平。用MRC-5细胞培养上清液诱导PC-9、H292细胞，采用Western blotting法检测c-Met及其下游通道蛋白表达情况。将56只雌性、SPF级BALB/c裸鼠随机分为8组，每组7只。在PC-9细胞诱导模型中，对照组（C组）和厄洛替尼处理组（E组）裸鼠皮下接种PC-9细胞悬液，MRC-5诱导组（H组）、MRC-5和厄洛替尼处理组（HE组）裸鼠皮下接种PC-9+MRC-5细胞悬液；当移植瘤直径达到4 mm时，C组和H组采用0.9%氯化钠溶液灌胃，E组和HE组采用厄洛替尼灌胃。在H292细胞诱导模型中，C组、E组裸鼠皮下接种H292细胞悬液，H组、HE组裸鼠皮下接种H292+MRC-5细胞悬液；模型建立后灌胃方式同PC-9细胞诱导模型。给药结束后处死裸鼠，比较PC-9、H292细胞诱导模型中各组移植瘤重量。采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤组织中c-Met及其下游通道蛋白表达水平。结果 PC-9、H292细胞培养上清液中均未检测到HGF，MRC-5细胞培养上清液中HGF水平为（1 262±90）pg/ml。Western blotting法结果显示，MRC-5细胞培养上清液中HGF能活化PC-9、H292细胞中p-Met、p-Akt、p-Stat3、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-Erk1/2）活性。PC-9细胞诱导模型中：E组移植瘤重量小于C组（P＜0.05）；HE组移植瘤重量小于H组，大于E组（P＜0.05）。H292细胞诱导模型中：E组移植瘤重量小于C组（P＜0.05）；HE组移植瘤重量小于H组，大于E组（P＜0.05）。c-Met、p-Met分别定位于细胞膜和细胞质。在PC-9、H292细胞诱导模型中：C组、H组、E组、HE组c-Met表达水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；H组、HE组p-Met表达水平分别高于C组、E组（P＜0.05）。Stat3定位于细胞质，p-Stat3定位于细胞核。在PC-9、H292细胞诱导模型中：C组、H组、E组、HE组Stat3表达水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；H组、HE组p-Stat3表达水平分别高于C组、E组（P＜0.05）。Akt、p-Akt均定位于细胞质。在PC-9、H292细胞诱导模型中：C组、H组、E组、HE组Akt表达水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；H组、HE组p-Akt表达水平分别高于C组、E组（P＜0.05）。Erk1/2定位于细胞质，p-Erk1/2定位于细胞核。在PC-9、H292细胞诱导模型中：C组、H组、E组、HE组Erk1/2表达水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；H组、HE组p-Erk1/2表达水平分别高于C组、E组（P＜0.05）。结论 MRC-5细胞分泌的HGF能够在裸鼠体内诱导敏感NSCLC细胞PC-9、H292对厄洛替尼耐药，HGF通过激活c-Met及其下游通道蛋白的磷酸化可能是不同基因型NSCLC细胞对厄洛替尼耐药的重要机制。
